【摘 要】
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目的 分析MC3T3E1细胞在纤维蛋白凝胶(fibrin gel,FG)内的细胞形态学、细胞增殖和成骨细胞分化作用,为将FG应用于组织工程奠定基础.方法 将MC3T3E1细胞接种于3种不同浓度(20
【机 构】
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中国人民武警部队医学院细胞生物与医学遗传学教研室,天津,300162
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目的 分析MC3T3E1细胞在纤维蛋白凝胶(fibrin gel,FG)内的细胞形态学、细胞增殖和成骨细胞分化作用,为将FG应用于组织工程奠定基础.方法 将MC3T3E1细胞接种于3种不同浓度(20、10、5 mg/mL)的FG内,分别设为实验组A、B、C组,对照组(D组)采用无凝胶正常培养基培养.于不同时间点通过倒置相差显微镜和激光扫描共聚焦显微镜观察细胞在凝胶内的形态学变化,荧光分光光度计测定细胞增殖状态,酶标仪和yon Kossa染色分析细胞ALP活性和钙盐沉积;培养14 d和21 d行RT-PCR检测ALP和骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)mRNA的表达.结果 MC3T3E1细胞在A、B、C组FG内培养至21 d,细胞具有较长突起且连接成网,而D组细胞呈纺锤形或立方形.D组细胞随培养时间延长荧光强度逐渐增高,至14 d达最高,28 d降至最低;A、B、C组细胞培养至28 d时荧光强度达最高,与D组比较差异有统计学意义(P<0.05).D组细胞随培养时间延长ALP活性逐渐升高,至28 d达最高:A、B组培养21 d时ALP活性最强,与D组比较差异有统计学意义(P0.05).von Kossa染色示培养21、28 d,A组在细胞附近的凝胶区出现矿化结节,D组至28 d仍未见矿化结节形成.RT-PCR检测示培养后21 d,A组的ALPmRNA和BSPmRNA表达均较D组增强(P<0.05).结论 MC3T3E1细胞在FG内培养21 d后成骨细胞分化最明显,细胞增殖维持活跃状态.
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