【摘 要】
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目的 原核表达截短型水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E(glycoprotein E,gE),并评价其免疫原性.方法 通过GenBank获取VZVgE的第25～ 537位氨基酸(gE25-537)相应的核酸序列,经密码子优化,合成质粒pUC-VZV-gE掰7-His;以其为模板扩增目的 片段,克隆至载体pET-21b,构建重组表达质粒pET-21 b-VZV-gE25-537-His,转化感受态E coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,包涵体经U
【机 构】
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长春祈健生物制品有限公司,吉林长春130012;上海倍谙基生物科技有限公司,上海200120;赤峰学院附属医院,内蒙古赤峰024005
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目的 原核表达截短型水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E(glycoprotein E,gE),并评价其免疫原性.方法 通过GenBank获取VZVgE的第25～ 537位氨基酸(gE25-537)相应的核酸序列,经密码子优化,合成质粒pUC-VZV-gE掰7-His;以其为模板扩增目的 片段,克隆至载体pET-21b,构建重组表达质粒pET-21 b-VZV-gE25-537-His,转化感受态E coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,包涵体经Urea溶解后,进行镍离子层析柱纯化.将纯化蛋白与弗氏佐剂混合,经皮下多点免疫小鼠,共免疫3次,末次免疫2周,经尾部静脉采血,分离血清,检测血清效价和中和效价.结果 重组表达质粒pET-21b-VZV-gE25-537-His经双酶切及测序鉴定证明构建正确.目的 蛋白相对分子质量约62000,主要以包涵体形式表达,纯化后纯度达85％,且可与鼠抗gE单克隆抗体发生特异性结合.免疫3次后,小鼠血清效价可达1∶54954,中和效价为1∶21.75.结论 原核表达了VZV gE,该蛋白具有良好的免疫原性,有望成为制备带状疱疹疫苗的候选抗原.
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