【摘 要】
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[目的]探究shRNA载体定向敲除ZNF217基因表达对神经母细胞瘤KELLY细胞侵袭和凋亡的影响.[方法]构建人ZNF217基因的shRNA慢病毒载体,以神经母细胞瘤细胞系KELLY细胞为研究对象
【机 构】
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湖南省儿童医院普外二科 ,湖南 长沙,410007
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[目的]探究shRNA载体定向敲除ZNF217基因表达对神经母细胞瘤KELLY细胞侵袭和凋亡的影响.[方法]构建人ZNF217基因的shRNA慢病毒载体,以神经母细胞瘤细胞系KELLY细胞为研究对象,根据实验目的,设空白对照组(A组),空白载体病毒组(B组)和ZNF217基因沉默表达载体慢病毒组(C组).RT-PCR和Western blot检测ZNF217、Caspase-3和Caspase-9的表达水平.Transwell试剂盒检测细胞侵袭能力,AV-PI试剂盒检测细胞凋亡水平,CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力.[结果]慢病毒转染滴度为3×107 TU/mL,转染率为92％ 以上;RT-PCR和Western blot检测结果显示,C组ZNF217的mRNA和蛋白的相对表达量要明显低于于A组和B组(P<0.05),但是Caspase-3和Caspase-9的mRNA和蛋白的相对表达量要明显高于A组和B组(P<0.05);C组细胞增殖率要明显低于B组和A组,有显著性差异(P<0.05),C组细胞侵袭能力要明显低于B组和A组,有显著性差异(P<0.05);C组细胞的凋亡率要明显高于B组和A组,有显著性差异(P<0.05).[结论]shRNA载体定向敲除ZNF217基因表达可以抑制人神经母细胞瘤细胞系KELLY细胞的增殖和侵袭,抑制凋亡,可以作为神经母细胞瘤的潜在治疗靶点.
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