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目的
探讨对NVP耐药的I型艾滋病病毒(HIV-1)毒株的诱导方法,获得能够产生连续稳定传代的对NVP高度耐药的HIV-1毒株。
方法MT4细胞中先后加入终浓度为100TCID50的HIV-1实验室毒株89.6与终浓度为10倍IC50的NVP药物溶液,在药物浓度不变的条件下传代,培育HIV-1病毒。提取每代培养液上清病毒RNA,逆转录后使用巢式PCR扩增HIV-1 pol区基因,收集目标片段并进行测序分析。
结果诱导培养所得耐药株由第5代开始与野生株相比,出现NVP IC50变化,倍数约为3倍,培养11代后,变化倍数高达178倍。此外,发生Y181C和Y188Y位点突变。
结论本实验中在体外经诱导所得耐药株对NVP具有较高的耐药性,并可获得稳定传代。