【摘 要】
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目的 建立汉逊酵母表达的重组诺如病毒基因工程疫苗中残余宿主DNA实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测方法,并进行验证.方法 采用磁珠法提取汉逊酵母基因
【机 构】
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兰州生物制品研究所第四研究室,甘肃兰州730046
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目的 建立汉逊酵母表达的重组诺如病毒基因工程疫苗中残余宿主DNA实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测方法,并进行验证.方法 采用磁珠法提取汉逊酵母基因组DNA,获得标准品,建立qPCR标准曲线,并进行专属性、线性、准确度、精密度和耐用性验证.结果 专属性验证结果显示,与对照制剂(注射用水、缓冲液、Vero细胞和CHO细胞培养上清DNA)相比,建立的方法对汉逊酵母DNA具有特异性扩增曲线;线性验证中5次试验标准曲线相关系数(R2)均＞0.98;准确度验证试验不同浓度样品的加标回收率在95.12％～105.72％之间,均在70％～130％范围内;重复性和中间精密度验证试验相对标准偏差(RSD)均小于30％;耐用性验证中,Proteinase K不同消化温度下检测结果的RSD为20.75％,不同蛋白浓度供试品检测结果的RSD为27.11％,均符合《中国药典》三部(2015版)要求.结论 建立的方法专属性、线性、准确度、精密度和耐用性均符合要求,可用于检测重组诺如病毒类病毒颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗中残余宿主DNA.
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