【摘 要】
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目的 探讨新生猪睾丸Sertoli细胞抵御人血清中灭然抗体介导的补体杀伤作用及其主要机制.方法 分离培养10～15口龄的湖北白猪睾丸Sertoli细胞;以猪血管内皮细胞(PED)为对照,采用流式细胞仪(FACS)及免疫荧光检测并比较两种细胞天然抗原α-Gal的表达;FACS枪测并比较两种细胞分别与正常人血清(NHS)中天然抗体IgM、IgG的结合情况;乳酸脱氢酶(LDH)检测20%NHS对Sert
【机 构】
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430030,武汉,华中科技人学同济医学院附属同济医院器官移植研究院,教育部器官移植重点灾验室卫生部器官移植重点实验室,430030,武汉,华中科技人学同济医学院附属同济医院器官移植研究院,教育部器官
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目的 探讨新生猪睾丸Sertoli细胞抵御人血清中灭然抗体介导的补体杀伤作用及其主要机制.方法 分离培养10～15口龄的湖北白猪睾丸Sertoli细胞;以猪血管内皮细胞(PED)为对照,采用流式细胞仪(FACS)及免疫荧光检测并比较两种细胞天然抗原α-Gal的表达;FACS枪测并比较两种细胞分别与正常人血清(NHS)中天然抗体IgM、IgG的结合情况;乳酸脱氢酶(LDH)检测20%NHS对Serto-li细胞及PED细胞的杀伤;MTT法检测两种细胞在20%NHS中培养的活性;细胞免疫荧光检测补体C3c、C4d在Sertoli细胞、PED细胞的沉积;细胞免疫组化及免疫荧光检测补体C5b-9在两种细胞上的沉积.结果 猪睾丸Sertoli细胞表达ot-Gal,但明显弱于PED细胞,猪睾丸Sertoli细胞能与天然抗体(主要是IgM)结合;20%NHS对Sertoli细胞、PED细胞的杀伤率分别为24.38%±0.50%、53.13%±14.53%,P<0.01;两种细胞在20%NttS中的活性分别为98.73%±18.84%、52.43%±8.08%,P<0.01;免疫荧光及组化可见PED细胞上有补体C3c、C4d、C5b-9的沉积;但Sertoli细胞仅有C3c、C4d沉积,而未见C5b-9沉积.结论 猪睾丸Sertoli细胞可以显著抵御人血清巾天然抗体介导的杀伤作用,其机制可能与Sertoli细胞低表达α-Gal并抑制补体攻膜复合物形成有关。
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