【摘 要】
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目的 重组表达金黄色葡萄球菌β-溶血素及其突变体蛋白,研究影响β-溶血素鞘磷脂酶活性的关键氨基酸位点.方法 根据已报道的β-溶血素晶体结构,以金葡菌COL菌株基因组为模板,
【机 构】
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军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所,北京100850
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目的 重组表达金黄色葡萄球菌β-溶血素及其突变体蛋白,研究影响β-溶血素鞘磷脂酶活性的关键氨基酸位点.方法 根据已报道的β-溶血素晶体结构,以金葡菌COL菌株基因组为模板,利用重叠PCR技术对hlb基因进行点突变,构建重组表达载体pET-28a-hlbH-288-N和pET-28a-hlbH-161-A,经IPTG诱导表达目的蛋白,通过Ni2+柱亲和纯化获得蛋白HlbH-288-N、HlbH-161-A及Hlb;利用溶血实验检测Hlb蛋白及两种突变体蛋白的鞘磷脂酶活性.结果 获得纯度较高的HlbH-288-N和HlbH-161-A蛋白;溶血活性实验结果 表明,Hlb和HlbH-161-A蛋白能有效裂解绵羊红细胞(RBC),而HlbH-288-N蛋白不能裂解绵羊RBC.结论 Hlb蛋白第288位组氨酸是影响其鞘磷脂酶活性的关键位点.
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