胺碘酮联合甘草次酸增强肝癌HepG2细胞凋亡和自噬的实验研究

来源 :四川大学学报(医学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:hz198119
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目的研究胺碘酮联合甘草次酸对人肝癌HepG2细胞的活性、凋亡及自噬的影响。方法单独使用或联合使用20μmol/L胺碘酮与不同浓度甘草次酸处理HepG2细胞48h后,采用MTT法检测细胞存活率;单独或联合作用24h后采用AnnexinⅤ/PI流式细胞术检测细胞凋亡,采用蛋白质印迹技术检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3和p62的表达;荧光显微镜下观察EGFP-LC3绿色荧光聚集体的形成;另外,预先加入自噬抑制剂羟氯喹(HCQ)和自噬促进剂雷帕霉素,采用同样的实验方法研究自噬对细胞活性和凋亡的影响。结果不同浓度甘草次酸与20μmol/L胺碘酮联合作用48h后HepG2细胞存活率均低于单药组,当80μmol/L甘草次酸与20μmol/L胺碘酮时,细胞存活率为50%左右,故后续实验中甘草次酸浓度均为80μmol/L。联合作用组细胞凋亡率高于单药组,Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白的表达量高于单药组,p62蛋白的表达量低于单药组;荧光显微镜观察结果显示联合作用组EGFP-LC3荧光聚集体数量多于单药组;胺碘酮与甘草次酸联合作用于HepG2细胞,加入自噬抑制剂可抑制自噬促进细胞凋亡,降低细胞活性,采用自噬促进剂促进自噬细胞凋亡率降低,活性增加。结论胺碘酮与甘草次酸联用可诱导肝癌HepG2细胞凋亡增加,细胞活性降低,自噬水平增加;其诱导的自噬对细胞是一种保护性机制。
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