目的:优化采用大孔吸附树脂分离、纯化返魂草有效成分的工艺。方法:以返魂草中有效成分绿原酸和金丝桃苷的吸附量、解析量等为考察指标,通过静态吸附选择适合的大孔吸附树脂型号;以绿原酸和金丝桃苷的洗脱量等为指标,采用动态吸附法确定最大上样量、水洗量、洗脱剂乙醇的体积分数及收集量等最优的分离、纯化条件。结果:7种型号树脂中以HPD100树脂纯化性能最好;在上样液质量浓度为6 mg/ml、上样速度为2 ml/min时,以最大上样量为3倍柱体积(BV)、水洗量为2.5 BV、60%乙醇洗脱并收集3 BV为最优条件。纯化后提取物中绿原酸和金丝桃苷含量由0.90、0.18 mg/g增加到7.26、1.04 mg/g;验证试验中各指标的RSD均≤3.0%(n=3)。结论:建立的以HPD100大孔吸附树脂分离、纯化返魂草中有效成分的工艺稳定、高效。