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目的
对中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)刺突蛋白受体结合区(RBD)蛋白进行原核表达、纯化与鉴定及抗原性初步研究。
方法人工合成密码子优化的MERS-CoV RBD编码基因，克隆至pET30a(＋)载体，构建重组表达质粒，转化至BL21(DE3)。利用IPTG诱导，探索优化表达条件，并用镍离子亲和层析纯化，SDS-PAGE和Western blot进行鉴定，并采用间接ELISA对原核表达的RBD进行抗原活性和特异性初步分析。
结果重组RBD蛋白主要以包涵体形式表达，以37℃ 0.5 mmol/L IPTG诱导4 h表达量最高；变性复性后纯化获得了较纯的重组RBD蛋白，相对分子质量大小约为29×103，与预期一致；Western blot表明其能与感染MERS-CoV的小鼠血清发生特异性反应；间接ELISA显示原核表达RBD蛋白在检测正常和MERS-CoV感染患者血清方面表现出较好的抗原活性和特异性。
结论本研究首次利用原核表达系统成功表达并纯化获得重组MERS-CoV RBD蛋白，为MERS-CoV的免疫学检测及疫苗学研究提供了基础。