【摘 要】
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菊糖作为益生元和膳食纤维,具有许多重要的生理功能,广泛应用于食品、医药等领域.微生物菊糖蔗糖酶可以以蔗糖为底物合成较植物菊糖具有更高分子量的菊糖.文中通过基因数据库
【机 构】
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江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品安全国际合作联合实验室,江苏无锡214122
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菊糖作为益生元和膳食纤维,具有许多重要的生理功能,广泛应用于食品、医药等领域.微生物菊糖蔗糖酶可以以蔗糖为底物合成较植物菊糖具有更高分子量的菊糖.文中通过基因数据库筛选获得一段拟表达菊糖蔗糖酶的基因.通过N-端和C-端截断的方式,保留中间催化域,构建重组质粒.将重组质粒在大肠杆菌表达系统中表达,粗酶液经Ni2+亲和层析纯化,获得分子量约为65 kDa的重组酶.以蔗糖为唯一底物时,重组酶的最适pH和温度分别为5.5和45 ℃.金属离子在不同程度上抑制酶的活性.产物多糖分离纯化后,使用核磁共振鉴定产物多糖为β-(2,1)糖苷键连接的菊糖.最后对菊糖合成的条件进行优化,结果表明:以700 g/L的蔗糖为底物,加酶量4U/mL时,7h后菊糖产量达到最大,约为287 g/L,蔗糖到菊糖的转化率约为41％.
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