【摘 要】
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目的:探讨高表达热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)对骨骼肌细胞(C2C12)葡萄糖有氧氧化的影响.方法:通过构建重组pTRE2hyg-Hsp70质粒,稳定转染C2C12骨骼肌细胞系,建
【机 构】
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南京中医药大学康复医学系 南京210023
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目的:探讨高表达热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)对骨骼肌细胞(C2C12)葡萄糖有氧氧化的影响.方法:通过构建重组pTRE2hyg-Hsp70质粒,稳定转染C2C12骨骼肌细胞系,建立Hsp70高表达的C2C12细胞系.另设未转染组为对照组.在转染前及转染后细胞培养的不同时间点(0天、3天、7天),采用生化仪检测培养液中葡萄糖和乳酸含量,用比色法测定柠檬酸合成酶(CS)、α--酮戊二酮脱氢酶(KGDH)、NADH-泛醌还原酶(complex Ⅰ,CⅠ)、泛醌-细胞色素C还原酶(complex Ⅲ,CⅢ)等葡萄糖有氧氧化关键酶的活性,并测定细胞内ATP水平.结果:与对照组相比,高表达Hsp70的C2C12细胞在培养的3天、7天,培养液葡萄糖的消耗和乳酸的产生明显升高,细胞有氧氧化酶CS、KGDH、CⅠ和CⅢ的活性显著下降(P＜0.05),而细胞内ATP含量显著提高(P＜0.05).结论:高表达Hsp70的C2C12细胞有氧氧化相关酶的活性下降,抑制了葡萄糖的有氧氧化,提示Hsp70在骨骼肌细胞能量代谢中起重要调节作用.
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