【摘 要】
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构建重组hIL-10真核表达载体,探索在毕赤酵母中的表达,为进一步研究hIL-10生物学功能及临床应用奠定基础.PCR扩增目的基因hIL-10cDNA,经EcoR I/Xba I双酶切后,将其亚克隆至同
【机 构】
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遵义医学院免疫学教研室,珠海,519041
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构建重组hIL-10真核表达载体,探索在毕赤酵母中的表达,为进一步研究hIL-10生物学功能及临床应用奠定基础.PCR扩增目的基因hIL-10cDNA,经EcoR I/Xba I双酶切后,将其亚克隆至同样双酶切的载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-hIL-10;电转化法,将其转入毕赤酵母SMD1168,甲醇诱导Mut~+型转化子基因表达;对目的蛋白进行检测及纯化.扩增出了目的基因hIL-10 cDNA,重组质粒pPICZaA-hIL-10经酶切鉴定和序列测定正确;表达产物经SDS-PAGE分析在42.0 kD处可见较浓染条带,Western blotting分析可见特异条带;ELISA检测72 h上清液中目的蛋白浓度可达1.973 mg/L;纯化后目的蛋白纯度达67.0%.实现了重组hIL-10在毕赤酵母SMD1168中的成功表达和初步纯化.
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