【摘 要】
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目的 克隆并表达汉坦病毒(HV)Z10株(HV-Z10)N蛋白(NP)编码基因,建立基于辣根过氧化酶(HRP)标记重组NP(rNP)的rNP-IgM直接捕捉ELISA,检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清并评价
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目的 克隆并表达汉坦病毒(HV)Z10株(HV-Z10)N蛋白(NP)编码基因,建立基于辣根过氧化酶(HRP)标记重组NP(rNP)的rNP-IgM直接捕捉ELISA,检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清并评价其检测效果.方法 PCR扩增HV-Z10株NP编码基因,基因工程方法构建NP编码基因原核表达系统pET28a-Z10N-E.coli BL21DE3.SDS-PAGE了解rNP表达情况,离子交换法和Ni-NTA亲和层析法提纯rNP.Western blot检测rNP的特异性免疫反应性.建立HRP标记rNP-IgM直接捕捉ELISA检测HFRS患者血清样品,并与常规HV-IgM间接捕捉ELISA进行比较.结果 pET28a-Z10N-E.coli BL21DE3高效表达rNP.提纯rNP SDS-PAGE显示单一蛋白条带,HV-IgG能有效识别rNP并与之结合.94.73%(90/95)HFRS患者血清样品rNP-IgM直接捕捉ELISA检测结果阳性,HV-IgM间接捕捉ELISA阳性率为92.63%(88/95).两种IgM捕捉ELISAs检测的HFRS患者血清样品A450值分布及对多份不同稀释度血清检测的A450均值变化均相似.结论 成功构建了HV-Z10株NP编码基因高效原核表达系统.所建立的rNP-IgM直接捕捉ELISA可作为HFRS简便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法.
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