【摘 要】
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目的:建立毛细管区带电泳(capillary zone electrophoresis,CZE)方法,用于肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)灭活疫苗纯度检测及分析.方法:以样品检测峰高度、分离度、信噪
【机 构】
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北京生物制品研究所有限责任公司,国药中生生物技术研究院有限责任公司,北京101111
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目的:建立毛细管区带电泳(capillary zone electrophoresis,CZE)方法,用于肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)灭活疫苗纯度检测及分析.方法:以样品检测峰高度、分离度、信噪比为判断标准,对不同运行缓冲液、样品缓冲液、毛细管长度、上样时间等进行选择优化,确定毛细管区带电泳条件,同时采用HPLC法分离及免疫共沉淀法对各样品检测峰进行鉴定.利用建立的CZE方法对7批EV71灭活疫苗原液进行检测,采用面积归一法,计算疫苗原液纯度.结果:当运行缓冲液为pH 8.2硼酸缓冲体系、盐浓度为150 mmol· L-1、SDS浓度为10 mmol· L-1时,上样时间为100 s、毛细管有效长度为50 cm时,主检测峰高度最高、信噪比最优和分离度大于1.5.以含SDS 10 mmol·L-1的150 mmol·L-1 pH8.2硼酸盐缓冲液为运行缓冲液,5 mmol·L-硼酸盐缓冲液为上样缓冲液,以长50 cm、内径为50 μm的无涂层石英毛细管作为色谱分离柱,对EV71灭活疫苗原液纯度进行检测,可见2个样品检测峰,经HPLC法及免疫共沉淀法鉴定,样品检测峰1为EV71病毒颗粒,迁移时间6.98 min、样品检测峰2为杂质,迁移时间8.42 min;连续进样6次,2个样品检测峰的峰面积、峰起时间、峰止时间和保留时间的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均＜2.0％.应用该方法对7批EV71灭活疫苗原液纯度进行检测,为95.3％ ～99.4％,均大于95％.结论:初步建立了可用于EV71灭活疫苗原液纯度测定的毛细管区带电泳方法,为该疫苗的质量研究、工艺过程控制及稳定性研究奠定了基础.
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