【摘 要】
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目的 构建铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprH,研究其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达.方法 以铜绿假单胞菌PAO1标准株双链DNA为模板,通过PCR扩增OprH基因.经酶切后与载体pGEX-1λ
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所,重庆,400016
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目的 构建铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprH,研究其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达.方法 以铜绿假单胞菌PAO1标准株双链DNA为模板,通过PCR扩增OprH基因.经酶切后与载体pGEX-1λT进行连接,构建重组质粒pGEX-OprH,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和鉴定.结果 PCR扩增出660 bp的OprH编码基因;重组质粒经双酶切和PCR证实OprH基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE电泳发现表达产物相对分子质量约为47000 Mr,与前期预测结果一致,大肠埃希菌BL21(DE3)表达蛋白为菌体量的22％;免疫印渍表明Pa抗原免疫的小鼠血清能特异识别47000 Mr重组蛋白.结论 铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprH在E.coli BL21(DE3)中高效融合表达,表达的融合蛋白具有抗原特异性.
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