【摘 要】
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目的获得编码人酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)催化核心cDNA片段,并观察其表达.方法采用人的全长THcDNA为模板,设计特定的引物进行PCR扩增反应并构建真核表达载体--
【机 构】
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首都医科大学生物化学教研室,北京神经科学研究所
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目的获得编码人酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)催化核心cDNA片段,并观察其表达.方法采用人的全长THcDNA为模板,设计特定的引物进行PCR扩增反应并构建真核表达载体--质粒pCMVTHC.在对目的片段测序后,将重组质粒转染到大鼠原代培养骨骼肌细胞内,用免疫组织化学方法检测其表达. 结果获得了编码N-端缺失145个氨基酸的酪氨酸羟化酶催化结构域的cDNA片段,其表达载体构建正确.插入片段的DNA序列与人THmRNA相应序列完全一致,将其转入肌细胞内测得有酪氨酸羟化酶表达. 结论本研究结果为帕金森病的基因治疗提供了有价值的新工具.
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