用点突变的方法组建巨细胞病毒抗原决定簇基因的表达克隆

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hanjzh
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研究资料表明,人巨细胞病毒(HCMv)单一蛋白的单一抗原决定簇只能被部分患者阳性血清识别。组建在血清学诊断中能够替代全病毒抗原的基因工程抗原,需要含有病毒多种主要抗原蛋白的抗原决定簇。为搞清在表达载体中重复插入某一抗原决定簇基因是否能表达出更高抗原效价的融会蛋白,我们用点突变的方法,在表达载体中分别插入了人HCMv的ppUL32蛋白羧基端一个抗原决定簇基因的1个、2个和3个拷贝。在免疫转印检测中,这些克隆表达的融合蛋白与特异性阳性血清的反应性差别不明显。这表明,插入表达载体中目的基因的多寡对表达蛋白的抗原效价没有显著影响。 Research data show that a single antigenic determinant of a single human cytomegalovirus (HCMv) protein can only be recognized by positive sera in some patients. The construction of a genetically engineered antigen that can substitute for the whole virus antigen in serodiagnosis requires an antigenic determinant containing many major antigenic proteins of the virus. In order to find out whether the expression of repeated insertion of an antigenic determinant gene can express a higher antigen titer of fusion protein, we use point mutation method, were inserted into the expression vector human HCMv ppUL32 protein carboxyl end of a 1, 2 and 3 copies of the antigenic determinant gene. In the immunoblot assay, the reactivity of fusion proteins expressed by these clones with specific positive sera was not significantly different. This indicates that the amount of the target gene inserted into the expression vector does not have a significant effect on the antigen titer of the expressed protein.
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