论文部分内容阅读
对禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)σC基因进行大肠杆菌密码子优化,并将优化后的σC基因及其截短片段(122/156/192～326位氨基酸)克隆至pET-28a(+)载体,分别构建pET-28a(+)-σC,pET-28a(+)-σC-122,pET-28a(+)-σC-156和pET-28a(+)-σC-192重组载体。将测序鉴定正确的阳性质粒分别转化E.Coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导后产物经Western blot分析检测,显示σC及其截短蛋白σC-122、σC-156和σC-192在大肠杆菌中获得正确表达,相对分子质量分别为37 000,25 000,22 000和18 000,均能与ARV阳性血清发生特异性反应。本研究通过温度调控双水相萃取以及无机盐多步蛋白盐析沉淀前处理工艺,去除大肠杆菌表达重组蛋白中99%的内毒素。纯化后的σC及其截短蛋白,免疫21日龄SPF鸡,并于免后28 d进行抗体检测,结果显示截短蛋白免疫组血清抗体阳性比例仅为4/10,但重组蛋白σC免后抗体阳性比例可达到8/10,与全病毒类似,可作为ARV亚单位疫苗开发的候选蛋白。