【摘 要】
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目的 探讨肝硬化患者淤胆血清培养筛选体系诱导人骨髓间充质干细胞(MSC)向肝细胞分化的可行性.方法 分离健康成年人MSC,培养至4～6代后,加入成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)和肝细
【机 构】
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中山大学孙逸仙纪念医院肝胆胰外科, 广州,510120
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目的 探讨肝硬化患者淤胆血清培养筛选体系诱导人骨髓间充质干细胞(MSC)向肝细胞分化的可行性.方法 分离健康成年人MSC,培养至4～6代后,加入成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)和肝细胞生长因子(HGF)初步诱导1周,后置于总胆红素终质量浓度为5μmol/L的肝硬化患者淤胆血清培养体系中继续培养2周,然后对存活细胞进行形态学观察,甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)、细胞角蛋白18(CK18)免疫荧光染色,AFP、ALB的反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测,细胞糖原染色及尿素合成功能分析.结果 经FGF-4和HGF初步诱导1周的MSC,置于总胆红素终质量浓度为5 μmol/L的肝硬化患者淤胆血清中培养,2周后细胞呈三角形或多边形,胞质丰富,核大,呈现良好的均质性;免疫荧光染色结果显示有AFP、ALB、CK18表达;RT-PCR结果显示有AFP、ALB的mRNA转录;细胞有糖原和尿素合成功能.结论 采用含肝硬化患者淤胆血清的培养体系能从经FGF-4和HGF初步诱导的MSC中有效筛选出具有功能的肝样细胞.
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