【摘 要】
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目的研究胰岛素(INS)对体外培养的Zucker大鼠肾小球系膜细胞(GMC)核因子κB(NF-κB)活化的影响,以及INS诱导的NF-κB活性的变化与Zucker大鼠年龄(即病程)以及基因型的相关性.
【机 构】
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南京医科大学第二附属医院儿科,法国国家健康卫生研究院430所肾脏免疫病理研究小组
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目的研究胰岛素(INS)对体外培养的Zucker大鼠肾小球系膜细胞(GMC)核因子κB(NF-κB)活化的影响,以及INS诱导的NF-κB活性的变化与Zucker大鼠年龄(即病程)以及基因型的相关性.方法(1)分别取Zucker肥胖大鼠(3月龄和10月龄)和Zucker瘦型大鼠(3月龄和10月龄)4组大鼠的GMCs(O3m,O10m,L3m,L10m)进行传代培养.(2)凝胶迁移率实验(EMSA)和超迁移率实验(GSA)检测不同浓度及不同时相INS对Zucker大鼠肾小球系膜细胞NF-κB活性的影响,以及NF-κB二聚体中p50和p65成分的变化.(3)应用Western印迹检测胞浆和胞核内NF-κB p65水平.结果(1)INS诱导后,4组GMC内NF-κB活性均较对照组明显增强(F=219.65,P＜0.01);(2)随着INS刺激浓度增加和时间的延长,GMC内NF-κB活性相应增强,0.5 mg/L的INS刺激24 h时,NF-κB活性强度达最高峰;INS刺激浓度升为5 mg/L,则15 h达最高峰;(3)INS主要激活NF-κB二聚体成份中的p65;(4)O3m组NF-κB的活性显著高于O1om组(P＜0.01),L3m组NF-κB的活性显著高于L10m组(P＜0.01),O3m组显著高于L3m组(P＜0.01),O10m组显著高于L10m组(P＜0.01).(5)INS可呈剂量依赖性地降低胞浆内的p65的蛋白水平和上调胞核内p65水平.结论INS可诱导Zucker大鼠GMC内NF-κB活化,其活化方式呈时间和剂量依赖;活化强度与大鼠的基因型及鼠龄有一定的相关性.INS对Zucker肥胖型、幼龄大鼠GMC中NF-κB的激活作用最为明显.推测INS对GMC内NF-κB的诱导活化可能在Zucker肥胖大鼠的早期肾损害中起着重要的作用.
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