【摘 要】
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[目的]裂解性多糖单加氧酶(LPMO)是一类铜离子依赖型的单加氧酶,能够通过氧化的方式断裂糖苷键,进而显著提高多糖的降解效率,受到广泛的关注.但是LPMO单加氧酶的性质使其容易被自身氧化而失活,且底物的聚合性质和释放产物的多样性使得对LPMO催化过程活性的评估变得十分困难.[方法]本研究以2,6-二甲氧基苯酚(2,6-DMP)和H12O2为底物,建立了测定几丁质裂解性多糖单加氧酶(BtLPMO 10A)活性的评价体系,并研究该酶在降解几丁质底物过程中的稳定性.[结果]研究发现,在测定BtLPMO10A活性
【机 构】
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大连理工大学生物工程学院,辽宁大连116024
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[目的]裂解性多糖单加氧酶(LPMO)是一类铜离子依赖型的单加氧酶,能够通过氧化的方式断裂糖苷键,进而显著提高多糖的降解效率,受到广泛的关注.但是LPMO单加氧酶的性质使其容易被自身氧化而失活,且底物的聚合性质和释放产物的多样性使得对LPMO催化过程活性的评估变得十分困难.[方法]本研究以2,6-二甲氧基苯酚(2,6-DMP)和H12O2为底物,建立了测定几丁质裂解性多糖单加氧酶(BtLPMO 10A)活性的评价体系,并研究该酶在降解几丁质底物过程中的稳定性.[结果]研究发现,在测定BtLPMO10A活性的过程中,较高的酶浓度,过氧化氢浓度和2,6-DMP浓度均使得反应过程脱离了线性范围,而抗坏血酸的加入能够提高灵敏度,但是对活性测定过程有较大影响.BtLPMO10A对2,6-DMP 和 H2O2的Km分别为0.53 mmol/L和5.31 mmol/L,亲和性高于纤维素裂解活性的NcLPMO9C.BtLPMO 10A在还原剂抗坏血酸存在的条件下容易失活,但底物几丁质的加入能够一定程度上稳定LPMO的活性,但是其在降解几丁质过程中活性依然会下降.[结论]本研究以2,6-二甲氧基苯酚为底物检测BtLPMO10A对底物的亲和力,并研究BtLPMO10A的稳定性,为深入评价具有几丁质氧化裂解活性的LPMO的稳定性及其在几丁质降解过程中的应用提供了重要信息.
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