探讨微小RNA-1（miR-1）在高糖培养所致大鼠心肌纤维化中的作用途径。
方法取1～3日龄SD大鼠心尖组织培养原代心肌成纤维细胞，传代至3～4代细胞后被随机分为正常糖空病毒组（CON+ Lv-Vehicle组）、正常糖miR-1沉默组（CON+Lv-miR1组）、高糖空病毒组（HG+Lv-Vehicle组）、高糖miR-1沉默组（HG+Lv-miR1组）、高糖空病毒抑制剂组（HG+Lv-Vehicle+CC组）、高糖miR-1沉默抑制剂组（HG+Lv-miR1+CC组）。将细胞分别置于葡萄糖5.5 mmol/L（正常糖）和25.0 mmol/L（高糖）的DMEM培养基中，接种含miR-1沉默序列的慢病毒载体或慢病毒；抑制剂组于取样前12 h加入20 μmol/L腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂Compound C。采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测磷酸化AMPK（p-AMPK）、胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ、基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）、自噬流相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ（LC3B-Ⅱ）、死骨片重组蛋白1（p62/SQSTM1）的蛋白表达。
结果体外培养大鼠心肌成纤维细胞的纯度达97%。与CON+Lv-Vehicle组比较，CON+Lv-miR1组p-AMPK表达无明显变化，HG+Lv-Vehicle组p-AMPK表达明显降低（p-AMPK/t-AMPK：44.72±3.29比100.00±7.77，P<0.01）；HG+Lv-miR1组p-AMPK表达较HG+Lv-Vehicle组明显增高（p-AMPK/t-AMPK：60.52±5.16比44.72±3.29，P<0.05）。与HG+Lv-Vehicle组比较，HG+Lv-miR1组胶原蛋白、MMP、LC3B-Ⅱ和p62/SQSTM1表达均明显降低；给予AMPK抑制剂后胶原蛋白、MMP、LC3B-Ⅱ、p62/SQSTM1表达均明显增高（HG+Lv-Vehicle+CC组与HG+Lv-Vehicle组比较：胶原蛋白Ⅰ/β-actin为158.74±13.21比100.00±7.64，胶原蛋白Ⅲ/β-actin为177.38±17.31比100.00±5.18，MMP-2/β-actin为130.09±14.31比100.00±10.47，MMP-9/β-actin为215.54±20.92比100.00±11.28，LC3B-Ⅱ/β-actin为159.34±13.83比100.00±6.44，p62/SQSTM1/β-actin为201.01±24.02比100.00±8.62；HG+Lv-miR1+CC组与HG+Lv-miR1组比较：胶原蛋白Ⅰ/β-actin为108.69±9.93比80.83±7.24，胶原蛋白Ⅲ/β-actin为127.68±10.46比81.56±9.97，MMP-2/β-actin为106.66±10.21比74.80±7.43，MMP-9/β-actin为145.65±11.56比74.63±10.55，LC3B-Ⅱ/β-actin为150.15±13.28比22.98±2.87，p62/SQSTM1/β-actin为130.48±10.74比49.90±2.27，均P<0.05）。
结论miR-1基因沉默对高糖培养致大鼠心肌成纤维细胞纤维化具有抑制作用，其机制可能与上调AMPK磷酸化表达、恢复成纤维细胞自噬流有关。