【摘 要】
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利用RT-PCR方法扩增出欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SS-6毒株的核衣壳(N)蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上,构建了重组表达质粒pGEX-N,并将其转化到大肠杆
【机 构】
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南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室
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利用RT-PCR方法扩增出欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SS-6毒株的核衣壳(N)蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上,构建了重组表达质粒pGEX-N,并将其转化到大肠杆菌BL21中,在诱导剂IPIG的诱导下获得高效表达,重组蛋白的分子量约为40 ku.用纯化的重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体.经细胞融合获得一株可稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株,命名为1B6,将其连续培养20代后仍能稳定分泌抗体.亚型鉴定结果为IgG1型,其轻链为κ链;间接免疫荧光试验和免疫印迹试验均证明,1B6单抗既能与欧洲型PRRSV反应,也能与美洲型PRRSV反应;ELISA检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1∶640,腹水的效价为1∶256 000,为猪繁殖与呼吸综合征的诊断奠定了基础.
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