阻断肝再生增强因子表达对HepG2细胞转化生长因子-α及表皮生长因子受体表达的影响

来源 :中国病原生物学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tony_guang
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目的用RNA干扰技术阻断人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR)表达,观察人肝癌细胞HepG2中转化生长因子-α(transforming growth factor-α,TGF-α)及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达是否受影响,以阐明hALR在促进肝癌细胞生长的相关细胞因子网络中的作用。方法将构建好的人肝再生增强因子siRNA表达质粒pSIALR-A及其阴性对照质粒pSIALR-B分别转染至HepG2细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,计算转染效率。免疫细胞化学法检测转染细胞中hALR表达,确定抑制效果。根据转染质粒的不同,将HepG2细胞分为3组:转染组(转染pSIALR-A)、阴性对照组(转染pSIALR-B)和空白组(未转染重组质粒)。放射免疫法检测阻断肝再生增强因子后各组细胞培养上清中TGF-α水平,Western blot法检测阻断肝再生增强因子后各组细胞EGFR蛋白的表达。结果转染组、空白组和阴性对照组TGF-α分别为(5.27±0.86)pg/ml、(7.92±2.65)pg/ml和(6.50±1.28)pg/ml,转染组与空白组、阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);EGFR相对表达量分别为0.946±0.136、1.115±0.606和1.131±0.509,转染组与空白组、阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在促进肝癌细胞生长的细胞因子网络中,肝再生增强因子除了可以直接刺激肝癌细胞增殖外还可通过上调TGF-α及EGFR的表达水平参与肝癌的发生、发展。
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