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背景与目的:有学者用人端粒酶逆转录酶(TERT)启动子替换野生型腺病毒E1A自身的启动子,构建了一种肿瘤特异性增殖病毒,即溶瘤腺病毒Ad.TERT.细胞实验和动物实验表明,Ad.TERT有很好的抗癌作用.本研究目的是要在Ad.TERT中插入凋亡基因trail生成Ad.TERT-TRAIL,观察其是否具有更强的杀伤肿瘤细胞的功效并研究其机理.方法:通过腺病毒包装质粒pBHGE3与携带trail的小质粒pZhTERT-trail在HEK293细胞中同源重组构建Ad.TERT-TRAIL病毒,然后用PCR鉴定,并用Western blot检测E1A、trail基因的表达以进一步确证.用结晶紫染色法和MTT法检测Ad.TERT和Ad.TERT-TRAIL对肿瘤细胞和正常细胞杀伤作用的差异.用Western blot检测Caspase-3表达量以观察肿瘤细胞的凋亡情况,同时用流式细胞仪测定肿瘤细胞的凋亡率.结果:PCR扩增出来的条带为860 bp,即为trail基因.Western blot结果显示,Ad.TERT-TRAIL中的E1A和trail只在肿瘤细胞中表达,说明Ad.TERT-TRAIL构建成功.结晶紫染色结果表明,Ad.TERT-TRAIL对肿瘤细胞的杀伤力比Ad.TERT高10～100倍,而对正常细胞的影响跟Ad.TERT一样小.100 MOI(multiple of infection)Ad.TERT-TRAIL感染结肠癌细胞SW620 72 h后,细胞存活率为4%;而感染了Ad.TERT的SW620细胞存活率却达56%.两种病毒对正常细胞NHLF的影响都比较弱,存活率在85%以上.随着作用时间的延长,感染了Ad.TERT-TRAIL和Ad.TERT的SW620细胞中Caspase-3的表达量都在升高,但前者的表达量明显大于后者,说明前者所引起的肿瘤细胞的凋亡程度比后者高.流式细胞仪检测结果显示,Ad.TERT-TRAIL引起SW620细胞的凋亡率是Ad.TERT的4倍.结论:携带基因的溶瘤腺病毒Ad.TERT-TRAIL比单纯的溶瘤病毒Ad.TERT对肿瘤细胞的杀伤力更强,这种作用可能与trail基因能诱导Caspase-3表达量增加、大量肿瘤细胞凋亡有关.