探讨TMPRSS2启动的CD-5-FC自杀性基因系统联合植物化学药物对前列腺癌细胞系22RV1存活率的影响。
方法2016年3月至2016年10月将携带5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)的质粒TMPRSS2-VISA-CD/UPRT转染到前列腺癌细胞系22RV1中,采用蛋白质印迹法验证转染效果。选取携带5-FC的质粒、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)以及汉黄芩素、料木素、黄豆苷原、茶多酚等4种植物化学药物,采用MTS法分别在每种药物的预设浓度中筛选出可杀伤10%~40% 22RV1细胞的浓度。按照筛选出的浓度,分别将携带5-FC的质粒和5-FU与4种植物化学药物组合加入22RV1细胞共同培养;另外,将4种植物化学药物分别按照筛选的浓度单独与22RV1细胞共同培养。培养24、48、72h后分别行MTS实验,分析细胞活性。比较各联合培养组对22RV1细胞的杀伤力与单独用药组的差异。
结果蛋白质印迹法检测证实携带5-FC的质粒TMPRSS2-VISA-CD/UPRT被成功转染到前列腺癌细胞系22RV1中,并且在转染48 h时效果最明显。筛选出的5-FC所需浓度分别为83.32、833.20 μmol/L,5-FU所需浓度分别为76.87、768.70 μmol/L,4种植物化学药物所需浓度分别为2.00、10.00、20.00 μmol/L。结果显示83.32 μmol/L 5-FC或76.87 μmol/L 5-FU分别与10.00、20.00 μmol/L的4种植物化学药物联用组的细胞杀伤率与10.00、20.00 μmol/L的4种植物化学药物单药组的细胞杀伤率比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。833.20 μmol/L 5-FC或768.70 μmol/L 5-FU分别与2.00、10.00 μmol/L的4种植物化学药物联用组的细胞杀伤率与2.00、10.00 μmol/L的4种植物化学药物单药组的细胞杀伤率比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。83.32 μmol/L 5-FC或833.20 μmol/L 5-FC与76.87 μmol/L 5-FU或768.70 μmol/L 5-FU的细胞杀伤效果相同,差异无统计学意义(P>0.05),说明自杀性基因转染成功,而且作用与细胞毒药物作用效果相同。
结论应用携带5-FC的质粒可以成功、高效地将自杀性基因转染到前列腺癌细胞系22RV1中。携带5-FC的质粒对前列腺癌22RV1细胞增殖活力具有抑制作用,作用效果与5-FU相仿。汉黄芩素、料木素、黄豆苷原、茶多酚等4种植物化学药物不会协同自杀性基因增强22RV1细胞的凋亡。