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探讨α-硫辛酸(ALA)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)自噬功能的影响及可能机制。
方法选用SH-SY5Y细胞株进行实验。共分为5组，分别是空白对照组(A组)、ALA组(B组)、6-OHDA组(C组)、ALA＋6-OHDA组(D组)、雷帕霉素(RAPA)组(E组)。测定A～D组的细胞活性、细胞凋亡率、氧化应激水平，测定A～E组的GFP-LC3质粒转染及免疫印迹(Western blot)检测各组自噬相关蛋白包括微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、腺嘌呤核糖核苷酸依赖的蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、雷帕霉素的哺乳动物靶点(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达。
结果与对照组相比，6-OHDA组的细胞活性降低(P<0.01)，细胞凋亡率升高(P<0.01)，氧化应激水平升高(P<0.01)，LC3-Ⅱ的表达升高(P<0.05)，其中6 h时表达最高，p-AMPK的表达升高(P<0.05)，p-mTOR的表达降低(P<0.05)；与对照组相比，ALA组的上述指标均无明显变化；与6-OHDA组相比，ALA＋6-OHDA组的细胞活性升高(P<0.01)，细胞凋亡率降低(P<0.01)、氧化应激水平降低(P<0.01)，LC3-Ⅱ的表达降低(P<0.05)，p-AMPK的表达降低(P<0.05)，p-mTOR的表达升高(P<0.05)。
结论6-OHDA诱导了SH-SY5Y细胞的氧化应激和自噬，降低了细胞活性；ALA通过抑制AMPK/mTOR通路介导的自噬减轻了6-OHDA诱导的细胞损伤。