【摘 要】
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以化学渗透法破碎重组大肠杆菌细胞释放重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)包含体并对其复性。选择四种化学试剂(Triton X-100、EDTA、NaOH和SDS)对rhSOD重组大肠杆菌细胞进行破碎
【机 构】
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河北大学生物技术研究中心,河北省生物工程技术研究中心,北京师范大学生命科学学院
【基金项目】
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河北省教育厅科学研究计划项目(2006308);河北省科技研究与发展指导计划项目(06276455)
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以化学渗透法破碎重组大肠杆菌细胞释放重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)包含体并对其复性。选择四种化学试剂(Triton X-100、EDTA、NaOH和SDS)对rhSOD重组大肠杆菌细胞进行破碎实验,以SDS-PAGE检测破菌效果,结果0.5%Triton X-100和10 mmol·L-1 EDTA可以较好地破碎重组大肠杆菌细胞,所提取的包含体溶解液纯度与超声法相近,可达65%左右。采用透析法复性包含体,尿素终浓度0.1 mol·L-1时rhSOD包含体复性效果优于1.0 mol·L-1,比活分别为:Triton法2800 U·mg-1,EDTA法3200 U·mg-1,超声法2800 U·mg-1,复性rhSOD纯度达85%左右。本研究建立的用于破碎重组大肠杆菌释放rhSOD包含体的Triton法和EDTA法,包含体复性后比活等于或高于超声法,与机械破菌法相比,简便有效,成本低廉,无需特殊破菌设备,为放大规模破菌提取重组大肠杆菌包含体和复性奠定了实验基础。
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