研究miR-15a和miR-16靶向调控bcl-2的表达对结肠癌细胞耐药性的逆转作用。
方法将miR-15a和miR-16模拟物或抑制物转染结肠癌长春新碱（VCR）敏感细胞株HCT8或耐药细胞株HCT8/VCR，采用实时荧光定量PCR法检测miR-15a和miR-16的表达，Western blot法检测bcl-2和P糖蛋白（P-gp）蛋白的表达，细胞计数盒8（CCK8）法检测不同浓度VCR对HCT8和HCT8/VCR细胞生长的抑制作用。
结果实时荧光定量PCR法检测结果显示，空白对照组、阴性对照组和转染miR-15a模拟物组HCT8/VCR细胞中miR-15a的相对表达量分别为1.00、0.87±0.24和223.44±59.07，转染模拟物后，miR-15a的相对表达量明显升高（P＜0.001）；空白对照组、阴性对照组和转染miR-16模拟物组HCT8/VCR细胞中miR-16的相对表达量分别为1.00、0.66±0.19和107.32±22.58，转染模拟物后，miR-16的相对表达量明显升高（P＜0.001）。Western blot法检测结果显示，空白对照组、阴性对照组、转染miR-15a模拟物组和转染miR-16模拟物组HCT8/VCR细胞中bcl-2蛋白的相对表达量分别为1.00、0.97±0.02、0.51±0.06和0.65±0.03，转染模拟物后， bcl-2蛋白的表达下调（P＜0.05）。而P-gp蛋白的表达在转染模拟物后没有明显变化。CCK8法检测结果显示，经1、5、25和125 μg/ml VCR处理后，空白对照组、阴性对照组、转染miR-15a模拟物组和转染miR-16模拟物组HCT8/VCR细胞存活率的变化趋势基本一致，转染模拟物后，HCT8/VCR细胞的存活率明显降低（P＜0.05）。实时荧光定量PCR法检测结果显示，转染抑制物后，HCT8细胞中miR-15a和miR-16的表达明显降低（P＜0.001）。Western blot法检测结果显示，转染抑制物后，HCT8细胞bcl-2蛋白的表达明显上调（P＜0.05），而P-gp蛋白的表达没有明显变化。CCK8法检测结果显示，转染抑制物后，HCT8细胞的存活率明显高于空白对照组（均P＜0.05）。
结论miR-15a和miR-16可逆转结肠癌细胞的耐药性，其可能的机制是通过调控bcl-2蛋白的表达。