【摘 要】
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9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶基因是脱落酸合成途径的关键基因。本试验通过RT-PCR结合RACE技术从苹果SH40(Malus domestica×Malus Honanensis)茎尖组织中克隆了1条NCED基
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9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶基因是脱落酸合成途径的关键基因。本试验通过RT-PCR结合RACE技术从苹果SH40(Malus domestica×Malus Honanensis)茎尖组织中克隆了1条NCED基因,命名为MdNCED1(GenBank登录号为KC816734)。该cDNA序列全长2179 bp,包含1个编码606个氨基酸的开放阅读框。氨基酸同源性分析表明,MdNCED1与已报道的其他植物物种的氨基酸序列具有63.7%~93.0%的相似性。构建MdNCED1基因的原核表达载体pDEST15-MdNCED1,转入大肠杆菌(DE3),用IPTG诱导。SDS-PAGE分析表明,MdNCED1基因在大肠杆菌中被诱导表达的蛋白质分子量与预期结果一致。荧光定量结果表明,MdNCED1基因在SH28、M26、SH40及其嫁接品种嘎啦的表达趋势均呈先上升后下降的趋势,同时与其矮生程度呈正相关。
The 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase gene is a key gene for the abscisic acid synthesis pathway. In this study, one NCED gene was cloned from the shoot tips of apple (SH) (Malus domestica × Malus Honanensis) by RT-PCR and RACE technology and named as MdNCED1 (GenBank accession number KC816734). The cDNA sequence is 2179 bp in length and contains an open reading frame encoding 606 amino acids. Amino acid homology analysis showed that MdNCED1 shared 63.7% -93.0% similarity with other reported plant species. The prokaryotic expression vector pDEST15-MdNCED1 of MdNCED1 was constructed and transformed into E.coli (DE3) and induced by IPTG. SDS-PAGE analysis showed that MdNCED1 gene was induced in E. coli protein molecular weight consistent with the expected results. Fluorescence quantitative results showed that the expression trend of MdNCED1 gene in SH28, M26, SH40 and their grafted varieties showed a trend of first increasing and then decreasing, and positively correlated with the degree of dwarfism.
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