【摘 要】
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目的:构建带有人对氧磷酶1(hPON1)基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体,并检测其转染大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)后hPON1的表达.方法:提取流产胎儿肝脏的总RNA,RT-PCR获得cDNA,设计
【机 构】
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中南大学湘雅医学院生理学系血液生理研究室,新乡医学院生理学与神经生物学教研室,深圳湘雅生物医药研究院
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目的:构建带有人对氧磷酶1(hPON1)基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体,并检测其转染大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)后hPON1的表达.方法:提取流产胎儿肝脏的总RNA,RT-PCR获得cDNA,设计引物通过PCR获得PON1基因片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,将PON1基因片段切下,插入到质粒pAAV-IRES-GFP的多克隆位点,获得质粒pAAV-PON1-IRES-GFP,经酶切和测序鉴定.包装的病毒rAAV-PON1用斑点杂交检测滴度,并用其转染EPCs检测hPON1在mRNA水平的表达.结果:pAAV-PON1-IRES-GFP酶切和测序结果完全正确.斑点杂交检测病毒的滴度为1.7×1010v.g/mL,RT-PCR结果显示病毒转染EPCs后存在hPON1的表达.结论:成功构建了pAAV-PON1-IRES-GFP质粒,包装出较高滴度的rAAV-PON1,并且转染EPCs后可以检测到hPON1表达.
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