人CD154基因真核表达载体的构建及在Eca109细胞中的表达

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目的:构建人CD154基因真核表达质粒pcDNA3.1-CD154,初步观察转染该质粒后Eca109细胞的细胞生物学特性.方法:人外周血单个核细胞体外经PHA激活后提取总RNA,用RT-PCR技术扩增人CD154 cDNA全长并构建真核表达质粒pcDNA3.1-CD154.用LipofectamineTM2000介导pcDNA3.1-CD154质粒转染食管癌Eca109细胞株,RT-PCR检测转染细胞中CD154 mRNA的表达,观察细胞生长特征.结果:用T7/SP6通用引物测序证实重组质粒中插入片段为正向插入的人CD154基因.pcDNA3.1-CD154转染Eca109细胞后细胞异型性明显改善,生长速率减慢.结论:pcDNA3.1-CD154构建成功;转染该质粒的Eca109细胞生物学特性发生改变.
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