【摘 要】
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果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)是组蛋白甲基转移酶.研究表明EZH2在前列腺癌中起关键作用[1].我们应用Gibson Assembly法构建了pWPI-HA-EZH2慢病毒载体.rn一、材料与方法r
【机 构】
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215004,苏州大学附属第二医院泌尿外科
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果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)是组蛋白甲基转移酶.研究表明EZH2在前列腺癌中起关键作用[1].我们应用Gibson Assembly法构建了pWPI-HA-EZH2慢病毒载体.rn一、材料与方法rn1.pWPI载体Pac Ⅰ和Pme Ⅰ双酶切后,削平黏性末端,去磷酸化.rn2.以pCMV-HA-EZH2质粒为模板,设计引物,序列:上游:GTGAGGAATTTCGACATTTAAATTTAATGGCATACCCATACGAT-GTTCCA,下游:TCCTGCAGCCCGTAGTTTTCAAGGGATTTCCAT-TTCTCTTT.聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段,回收产物.rn3.PCR反应:反应体系参照文献[2]改进.7.5μlGibson master mix中加入100 ng预处理的pWPI载体、1μl前述PCR产物,加水至10μl.反应条件:50℃60 min.产物转化感受态细胞,挑取克隆,小提质粒,Xho Ⅰ酶切鉴定.
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