【摘 要】
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目的应用基因工程技术克隆肺炎球菌溶血素（pneumolysin,Pn）基因,为研制中耳炎蛋白多糖结合疫苗奠定基础.方法根据Walker等肺炎球菌溶血素基因序列（GenBank accession no.X52474）,
【机 构】
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复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻喉科,海规生物科技（上海）有限公司
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目的应用基因工程技术克隆肺炎球菌溶血素（pneumolysin,Pn）基因,为研制中耳炎蛋白多糖结合疫苗奠定基础.方法根据Walker等肺炎球菌溶血素基因序列（GenBank accession no.X52474）,设计一对各带有一个限制性酶切位点的引物,运用PCR从肺炎球菌的染色体DNA扩增出肺炎球菌溶血素基因.对该PCR产物进行酶切、回收,并将其克隆入表达载体pET-28a,然后转化至大肠杆菌JM109（DE3）宿主细胞中.结果通过常规基因克隆方法和PCR技术,成功构建重组体,酶切鉴定和基因测序证实
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