【摘 要】
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目的 探讨微小RNA-195(miR-195)对寡聚态β样淀粉蛋白(Aβ)1-42诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞(PC12细胞)炎症反应和凋亡的作用机制.方法 本研究起止时间为2018年3—11月.PC12细胞购自美国模式培养物保藏中心.运用25μmol/mL的Aβ1-42处理PC12细胞建立神经细胞损伤模型;将PC12细胞分为Aβ1-42+miR-con组、Aβ1-42+miR-195组、Aβ1-42+si-con组、Aβ1-42+ATP酶阳离子转运13A2小干扰RNA(si-ATP13A2)组、miR-con
【机 构】
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聊城市第四人民医院神经内科,山东 聊城252000
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目的 探讨微小RNA-195(miR-195)对寡聚态β样淀粉蛋白(Aβ)1-42诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞(PC12细胞)炎症反应和凋亡的作用机制.方法 本研究起止时间为2018年3—11月.PC12细胞购自美国模式培养物保藏中心.运用25μmol/mL的Aβ1-42处理PC12细胞建立神经细胞损伤模型;将PC12细胞分为Aβ1-42+miR-con组、Aβ1-42+miR-195组、Aβ1-42+si-con组、Aβ1-42+ATP酶阳离子转运13A2小干扰RNA(si-ATP13A2)组、miR-con组、miR-195组、Aβ1-42+miR-195+pcDNA组、Aβ1-42+miR-195+ATP13A2过表达质粒(pcDNA-ATP13A2)组.实时定量PCR检测细胞中miR-195、ATP13A2的mRNA的表达;Western blotting检测细胞中ATP13A2的蛋白表达;酶联免疫吸附实验检测细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;噻唑蓝法、流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-195与ATP13A2的结合力.结果 与对照组相比,Aβ1-42可显著下调PC12细胞中miR-195的表达[(0.22±0.04)比(1.01±0.06)],上调ATP13A2的表达[(0.78±0.08)比(0.41±0.05)];过表达miR-195可促进PC12细胞的增殖[(76.59±8.44)％比(52.73±5.82)％],抑制凋亡[(17.76±1.87)％比(26.56±2.12)％],抑制IL-1β[(875.28±118.47)pg/mL比(1753.84±215.92)pg/mL]、TNF-α[(185.32±23.27)pg/mL比(268.75±27.67)pg/mL]的表达;沉默ATP13A2可促进PC12细胞的增殖[(78.59±9.76)％比(53.59±6.46)％],抑制凋亡[(18.03±1.82)％比(24.73±2.55)％],抑制IL-1β[(953.64±105.28)pg/mL比(1880.77±238.49)pg/mL]、TNF-α[(152.81±22.46)pg/mL比(258.40±28.16)pg/mL]的表达.miR-195可抑制野生型ATP13A2细胞的荧光活性,且可负向调控ATP13A2的表达;过表达ATP13A2可逆转miR-195对Aβ1-42处理的PC12细胞的抗炎、增殖促进和凋亡抑制作用.结论 miR-195可抑制寡聚态Aβ1-42诱导PC12细胞的炎症反应和凋亡,其机制与靶向ATP13A2有关,将可为阿尔茨海默病的治疗提供新靶点.
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