陈元膏摩法对阳虚寒凝型膝骨性关节炎模型兔关节软骨细胞凋亡、基质金属蛋白酶及血清炎性因子的影响

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目的 探讨陈元膏摩法治疗阳虚寒凝型膝骨性关节炎(KOA)的效用及可能作用机制。方法 60只新西兰大白兔随机分为正常组、模型组、手法组、陈元膏组、陈元膏摩法组及扶他林组,每组10只。模型组和各干预组采用高分子绷带屈曲位固定+薄荷油、气候箱法建立兔阳虚寒凝型KOA模型。造模8周后,正常组和模型组不作干预;手法组给予单纯推拿手法;陈元膏组涂抹陈元膏剂;陈元膏摩法组在陈元膏组基础上行推拿手法治疗;扶他林组涂抹扶他林软膏,每日1次,连续6周。最后一次干预后次日进行取材,HE染色观察软骨、滑膜组织病理学变化并将切片进行病理学Mankin软骨组织学评分;ELISA法检测血清中炎性因子白细胞介素1β (IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素10 (IL-10)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)水平;Western Blot法检测B淋巴细胞瘤2 (Bcl-2)、B淋巴细胞瘤2相关X蛋白质(Bax)水平;免疫组化法及qRT-PCR法测定关节软骨组织中金属蛋白酶抑制剂1 (TIMP-1)、基质金属蛋白酶13 (MMP-13)、基质金属蛋白酶3 (MMP-3)蛋白及mRNA表达水平。结果 病理结果显示,正常组兔关节软骨细胞排列有序,基质均匀一致,滑膜组织结构正常,滑膜细胞排列整齐。模型组软骨基质失去均质性,部分区域软骨细胞崩解、消失、排列紊乱,滑膜细胞增大,层数增加,间质纤维组织增生伴部分玻璃样变性,较多慢性炎性细胞浸润。手法组、陈元膏组、陈元膏摩法组软骨细胞损伤均有不同程度改善,且陈元膏组及陈元膏摩法组改善程度优于手法组。与正常组比较,模型组兔关节软骨组织Mankin评分升高,血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平升高,软骨组织Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax值降低,Bax、MMP-13蛋白表达升高,MMP-3、MMP-13 mRNA表达升高,TIMP-1 mRNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,陈元膏摩法组兔关节软骨组织Mankin评分降低;各干预组血清IL-1β水平及软骨组织中MMP-3、MMP-13 mRNA水平降低,TIMP-1 mRNA水平升高;陈元膏摩法组、扶他林组IL-10水平、Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax值升高,Bax蛋白表达、MMP-13、TIMP-1蛋白表达降低(P<0.05)。与扶他林组比较,陈元膏摩法组Mankin评分降低,Bax蛋白表达、MMP-13 mRNA表达升高(P<0.05),两组各炎性因子水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 陈元膏摩法可改善软骨、滑膜病理组织形态,具有抗炎、抗软骨基质降解及抗软骨细胞凋亡作用,从而减轻关节软骨损伤,延缓阳虚寒凝型KOA病程进展。
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