背景:旁分泌在间充质干细胞治疗方面起主要作用。提取间充质干细胞裂解液,可以避免直接间充质干细胞本身所致栓塞、肿瘤以及免疫排斥反应等问题,然而目前提取间充质干细胞裂解液的方法存在差异。目的:比较超声破碎及反复冻融方法获得间充质干细胞裂解液的差异。方法:(1)从健康的人腹部皮下脂肪中分离出脂肪间充质干细胞,经贴壁筛选法纯化细胞,胎牛血清培养基体外培养扩增,并采用流式细胞检测仪鉴定其常用表面标记;(2)采用反复冻融及超声细胞破碎2种破壁方法,将1×10~9 L~-1,2×10~9 L~-1,4×10~9 L~-1 3种不同密度的细胞分别置于生理盐水与双蒸水中进行破碎,比较细胞破碎率及裂解液蛋白含量的差异。结果与结论:(1)通过体外分离人体脂肪组织,可获得脂肪间充质干细胞;(2)细胞裂解时,细胞浓度越高,破壁所需时间越长,而破碎时间越长,则细胞破碎率越大;(3)生理盐水中超声细胞破碎法得到的蛋白含量较其他条件高;(4)结果提示在生理盐水环境下使用超声方法提取脂肪间充质干细胞裂解液尤为有效,且推荐细胞浓度为4×10~9 L~-1以内。