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目的
研究在不同浓度链霉素下，aadA2基因盒在整合子attI位点的整合频率。
方法将已知序列的1类整合子克隆到pACYC184质粒，该重组质粒命名为pACIDA；将该整合子上的整合酶基因克隆到pET28a质粒，该重组质粒命名为pETINT；这两重组质粒依次转化大肠杆菌BL21(DE3)。转化后的大肠杆菌在加不同浓度的链霉素的LB液体培养基中，37 ℃过夜培养。使用荧光定量PCR技术分别测定aadA2基因盒在attI位点发生整合作用的整合子的拷贝数和总整合子的拷贝数，前者除以后者即可获得整合频率。
结果高表达整合酶的情况下，在加入的链霉素浓度分别为0、20、30、40、50 μg/ml时，aadA2基因盒在attI位点的整合频率依次为(1.97±0.24)×10－3、(3.23±1.77)×10－3、(3.27±0.67)×10－3、0.45±0.13、1.32±0.11。而在没有整合酶高表达的情况下背景频率低于(1.75±0.33)×10－7。
结论高浓度的链霉素能够促进整合子中aadA2基因盒在整合子中attI位点的重组效率。(中华检验医学杂志，2018, 41：531－535)