【摘 要】
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目的 建立一种快速简易检测食源性沙门氏菌的实时荧光定量环介导等温扩增(quantitative loop-mediated isothermal amplification,qLAMP)方法.方法 依据沙门菌属invA基因序列设计引物,并结合短时间增菌构建沙门氏菌快速检测qLAMP法,使用人工污染样品进行验证.结果 建立的qLAMP法最佳反应时间为40 min,最佳反应温度是65℃,最佳Mg2+浓度为6 mmol/L,Bst 2.0 WarmStart聚合酶的浓度为0.40 U/μL,反应特异性良好,纯培
【机 构】
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丽水市质量检验检测研究院,丽水 323000
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目的 建立一种快速简易检测食源性沙门氏菌的实时荧光定量环介导等温扩增(quantitative loop-mediated isothermal amplification,qLAMP)方法.方法 依据沙门菌属invA基因序列设计引物,并结合短时间增菌构建沙门氏菌快速检测qLAMP法,使用人工污染样品进行验证.结果 建立的qLAMP法最佳反应时间为40 min,最佳反应温度是65℃,最佳Mg2+浓度为6 mmol/L,Bst 2.0 WarmStart聚合酶的浓度为0.40 U/μL,反应特异性良好,纯培养实验表明方法检出限为100CFU/mL.将沙门氏菌人工添加至鸡胸肉、果蔬沙拉、山泉水中,经过7 h缓冲蛋白胨水有效增菌后所建立的qLAMP法在食品基质中的检出限达到5 CFU/25 g.结论 该方法准确、简单易行、实验成本低,可用于食品中沙门氏菌的快速检测.通过WarmStart Colorimetric LAMP试剂盒无需昂贵仪器即可快速检测,为沙门氏菌现场即时检测提供技术支持.
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