探讨糖基化终产物(advanced glycated end–products,AGEs)对小鼠成骨细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导物(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)及基质金属蛋白酶–2(matrix metalloproteinases–2,MMP–2)分泌的影响。
方法在培养的小鼠成骨细胞株(MC3T3–E1)中分别加入不同浓度(50、100、200及400 mg/L) AGEs干预24 h和同一浓度(200 mg/L)AGEs干预12、24及48 h,以无血清培养基(DMEM)和相应浓度牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)为对照。用酶联免疫吸附试验检测上清液中EMMPRIN蛋白分泌,用酶谱法检测上清液中MMP–2分泌。将EMMPRIN中和抗体分别加入DMEM组和50 mg/L AGEs组,用酶谱法检测上清液中MMP–2分泌。组间差异用方差分析进行检验。
结果不同浓度AGEs干预组上清液中EMMPRIN分泌水平[(7.34±0.11)、(10.86±0.07)、(14.48±0.14)及(15.43±0.23) μg/L]明显高于对应BSA组(q值分别为3.111、3.090、2.921及4.387,均P<0.05);上清液中MMP–2条带酶解量[(225.12±5.01)、(305.83±5.21)、(363.04±8.04)及(410.63±16.84)INT·mm2]明显高于BSA组(q值分别为3.109、3.545、5.912及5.895,均P<0.05)。200 mg/L AGEs干预12、24及48 h,EMMPRIN分泌水平[(12.41±0.02)、(17.88±0.35)及(18.88±0.36) μg/L]明显高于对应BSA组[q值分别为5.522、7.462及7.323,均P<0.05];干预24及48 h后,MMP–2条带酶解量[(222.18±14.53)及(246.53±5.96)INT·mm2]与BSA组比较差异有统计学意义(q值分别为4.159及4.321,均P<0.05)。加入2 mg/L EMMPRIN中和抗体的DMEM组MMP–2水平[(543.21±67.90)INT·mm2]明显低于DMEM组[(867.95±113.46)INT·mm2,q=6.354,P<0.05]。加入5 mg/L EMMPRIN中和抗体的50 mg/L AGEs干预组MMP–2水平[(127.63±11.36)INT·mm2]明显低于AGEs组[(160.76±17.45)INT·mm2,q=7.742,P<0.05]。
结论AGEs促进小鼠成骨细胞MC3T3–E1 EMMPRIN及MMP–2分泌,EMMPRIN抗体可部分减少AGEs增加的MMP–2分泌,提示AGEs可能通过增加成骨细胞EMMPRIN分泌而促进MMP–2分泌,从而参与骨质疏松的发病。