【摘 要】
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目的 研究缺氧对星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)表达水平的影响.方法 体外培养星形胶质细胞,用氯化钴建立星形胶质细胞缺氧模型,采用随机数字表法分为对照组和缺氧组,每组再分为15、30 min,1、2、4、6和12 h时间点亚组,共14组,每组6孔.观察星形胶质细胞形态;采用原位杂交、荧光定量、免疫细胞化学、Western blot方法检测AQP4基因及蛋白表达;用Ex-△△Ct表示AQP4基因
【机 构】
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中南大学湘雅医学院附属海口医院(海口市人民医院)放射科,海口,570208,中南大学湘雅医学院附属海口医院(海口市人民医院)放射科,海口,570208,中南大学湘雅医学院附属海口医院(海口市人民医院)
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目的 研究缺氧对星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)表达水平的影响.方法 体外培养星形胶质细胞,用氯化钴建立星形胶质细胞缺氧模型,采用随机数字表法分为对照组和缺氧组,每组再分为15、30 min,1、2、4、6和12 h时间点亚组,共14组,每组6孔.观察星形胶质细胞形态;采用原位杂交、荧光定量、免疫细胞化学、Western blot方法检测AQP4基因及蛋白表达;用Ex-△△Ct表示AQP4基因表达量、D表示AQP4蛋白表达量.结果 星形胶质细胞的AQP4基因和蛋白变化具有一致性(r=0.85,P＜0.01).对照组星形胶质细胞呈弱阳性表达.缺氧组星形胶质细胞内AQP4表达从15 min开始随时间的延长而增强,以1～4 h内最明显(mRNA表达缺氧组分别为0.26±0.04、0.31±0.02、0.36±0.04,对照组分别为0.06±0.01、0.09±0.01、0.08±0.01;t=16.51、18.20、15.26,均P＜0.01),6 h后缓慢增强,与对照组对应时间点相比差异均有统计学意义.随缺氧时间延长,细胞肿胀逐渐加重,以1～4 h时间点最显著,电镜下见细胞核增大、内质网和线粒体肿胀,并随时间推移而加重.12 h见少数细胞破裂.结论 缺氧所致星形胶质细胞的病理变化是细胞水肿,水肿程度与缺氧时间和AQP4高表达呈正相关,AQP4可能是星形胶质细胞水肿的重要分子基础。
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