【摘 要】
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目的:建立间接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)用于测定剑叶龙血素A(CA)含量。方法:合成半抗原剑叶龙血素A-4’-羧甲基醚(CA-4’-CME),再用碳二亚胺法将其与牛血清白蛋白(BSA)
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目的:建立间接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)用于测定剑叶龙血素A(CA)含量。方法:合成半抗原剑叶龙血素A-4’-羧甲基醚(CA-4’-CME),再用碳二亚胺法将其与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)分别偶联制备免疫原(CA-BSA)和包被原(CA-OVA),免疫小鼠制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA法并评估其分析性能。结果:通过紫外扫描分析CA-BSA和CA-OVA的偶联比分别为18∶1和24∶1。抗血清效价最高达到12 000。用四参数logistic方程拟合CA标准曲线,在分析范围0~0.80 mg·L-1内,相关系数(R2)≥0.99,IC500.66 mg·L-1,最低检测限0.045 mg·L-1,批内CV≤12.5%,批间CV≤14.7%,回收率92.7%~118.7%,对5种CA类似物的交叉反应率<5.38%。此方法检测龙血竭和龙血竭总黄酮中CA含量分别为1.27%,3.08%。结论:剑叶龙血素A间接竞争ELISA法精密度、准确度和特异性均较好,可方便地用于药物检测和分析。
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