【摘 要】
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[目的]研究猪肺炎支原体P97RI基因在毕赤酵母中的分泌表达及初步应用.[方法]根据Genbank中猪肺炎支原体P97R1基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心
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[目的]研究猪肺炎支原体P97RI基因在毕赤酵母中的分泌表达及初步应用.[方法]根据Genbank中猪肺炎支原体P97R1基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白P97R1基因,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-P97R1；PICZα-A-P97R1经Sac Ⅰ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株GS115；将PCR鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌P97R1蛋白于发酵上清液中,并通过SDS-PAGE电泳以及Western-blotting对其进行鉴定.[结果] P97R1蛋白基因获得了分泌性表达,表达量达499μg/ml,而且具有良好的反应原性；同时用表达蛋白经过各项优化建立了猪肺炎支原体间接ELISA检测方法,经检测该方法具有良好的特异性和重复性.[结论]该研究为猪肺炎支原体免疫检测试剂盒和基因工程疫苗的研制奠定了基础.
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