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以邻苯二甲酸二乙酯(diethyl phthalate,DEP)为研究目标,以4-氨基邻苯二甲酸二乙酯为半抗原,通过重氮法偶联载体蛋白并免疫动物,制备针对DEP的特异性兔多克隆抗体。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数,即包被抗原浓度为50ng/mL,4℃环境下包被12h;抗体用T液稀释;药物缓冲液选用pH5.4、0.005mol/L的PBS缓冲液;酶标二抗用P液稀释,稀释度为1/3000;反应时间是:一抗:二抗=30min:40min。基于此建立了间接竞争化学发光酶联免疫法检测DEP。该方法对D