【摘 要】
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目的探索水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的高效液相色谱分离纯化方法,确认其一级结构。方法比较PST、Source 30、PLHP 3种不同的反相色谱介质纯化HV12p-rPA的性能,
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目的探索水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的高效液相色谱分离纯化方法,确认其一级结构。方法比较PST、Source 30、PLHP 3种不同的反相色谱介质纯化HV12p-rPA的性能,并建立反相分离纯化方法。用MALDI-TOF-MS法测定HV12p-rPA的相对分子质量(Mr),采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS),分离与分析该蛋白质经胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶酶切后得到的多肽混合物,通过二级质谱和数据库检索对分离出的各个肽段进行序列鉴定。结果PST色谱介质性能最好。在流速2.0mL/min条件下,采用线性梯度洗脱得到的目标蛋白质样品纯度≥95%。测得该蛋白质的精确Mr为41473,与其理论Mr相符。肽段的实验检测值与理论平均值的数据比对表明,已检出肽段的总覆盖率≥85%。结论确定了HV12p-rPA蛋白质的反相分离纯化方法,验证了该蛋白质一级结构正确。
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