【摘 要】
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目的：原位检测肿瘤转移相关蛋白MTA1与NuRD复合体其他组分-Mi2、HDAC2及MBD3的相互作用并分析MTA1/NuRD复合体在HCT116细胞中的分布情况。方法首先利用co-IP技术体外验证MTA1
【机 构】
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首都医科大学附属北京朝阳医院医学研究中心,中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,首都医科大学附属北京妇产医院妇科肿瘤,
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目的：原位检测肿瘤转移相关蛋白MTA1与NuRD复合体其他组分-Mi2、HDAC2及MBD3的相互作用并分析MTA1/NuRD复合体在HCT116细胞中的分布情况。方法首先利用co-IP技术体外验证MTA1与NuRD复合体其他组分Mi2、HDAC2及MBD3在HCT116细胞裂解液中的相互作用。然后利用In Situ PLA技术，体内原位检测MTA1与三者的相互作用，并根据镜下阳性荧光信号数目，比较MTA1与Mi2、HDAC2及MBD3之间的作用强弱；根据相互作用位点的亚细胞分布情况，分析间期及M期MTA1/NuRD复合体的核质分布情况。结果首次从体内原位水平证实MTA1与NuRD复合体其他组分-Mi2、HDAC2及MBD3的相互作用；其作用强度HDAC2最高，Mi2次之，MBD3最弱；首次发现MTA1/NuRD复合体存在很明显的胞质分布（约占总量的1/4）；另外，我们还首次发现在M期MTA1/NuRD复合体不再位于核区，而是位于染色体外周。结论In Situ PLA技术是一项有效的原位检测蛋白相互作用的新技术；MTA1/NuRD复合体可能参与MTA1胞质中功能的发挥；并且其胞质分布可能参与M期进程调控。
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