【摘 要】
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目的 选择大鼠成纤维细胞和原代肝细胞共培养于胶原水凝胶支架中,进行多细胞的大块组织工程肝构建及体内植入研究,以期构建长期存活的功能性肝组织. 方法 采用3-D打印技术制
【机 构】
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西安交通大学机械制造系统工程国家重点实验室 西安,710049;第四军医大学西京消化病医院八科;英国利兹大学医学与生物工程研究所
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目的 选择大鼠成纤维细胞和原代肝细胞共培养于胶原水凝胶支架中,进行多细胞的大块组织工程肝构建及体内植入研究,以期构建长期存活的功能性肝组织. 方法 采用3-D打印技术制备硅胶模具,经成胶脱模制备胶原水凝胶支架.将大鼠肺成纤维细胞与原代肝细胞以0.4∶1比例种植于该支架中(B组),以种植同密度单纯原代肝细胞为对照(A组).体外培养1、3、7、14、21d,观察细胞形态并检测肝功能(白蛋白和尿素分泌量).取24只SD大鼠,采用皮下注射四氯化碳方法制备肝硬化模型,将A、B组组织工程肝分别植入大鼠腹腔大网膜内(n=12),植入后3、7、14、21、28 d行HE、细胞角蛋白18 (cytokeratin 18,CK18)及ALB染色观察. 结果 体外实验中,与A组相比,B组肝细胞呈多边形,细胞核大且圆,肝功能表达旺盛,并且在7d时聚团生长最多,7d后白蛋白及尿素分泌量显著增高(P＜0.05).体内实验中,B组肝细胞能存活至28 d,白蛋白和尿素分泌也显著增多,细胞团聚成条索形,形成了类正常肝脏组织. 结论 多细胞大块组织工程肝体内植入时形成了类正常肝脏组织,并长期存活,为构建结构和功能更完整的组织工程肝奠定了基础.
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