【摘 要】
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目的探讨构建与新生儿呼吸窘迫综合征相关的ABCA3基因突变体c.875A>T(p.E292V)和c.2169G>A(p.M723I)及其绿色荧光表达载体的方法,并观察其在人肺腺癌(A549)细胞株中的表达。
【机 构】
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西安交通大学医学院第一附属医院新生儿科/环境与疾病相关基因教育部重点实验室离子通道研究病室
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目的探讨构建与新生儿呼吸窘迫综合征相关的ABCA3基因突变体c.875A>T(p.E292V)和c.2169G>A(p.M723I)及其绿色荧光表达载体的方法,并观察其在人肺腺癌(A549)细胞株中的表达。方法应用重叠延伸PCR法构建ABCA3基因的两个突变体E292V和M723I,运用限制性酶切连接等技术构建两个突变体的绿色荧光表达载体,使用脂质体Lipofectamine 2000将构建的载体瞬时转染到A549细胞株,使其在体外表达,在荧光显微镜下观察转染效率,利用激光共聚焦显微镜观察重组子的表达情况。结果构建的两个突变体E292V和M723I经测序分别证实ABCA3基因c DNA第875位碱基A变为T和第2169位碱基G变为A,重组子转染A549细胞后,野生型和突变型基因的蛋白质都在细胞内成功表达。结论成功构建了ABCA3基因野生型及突变型的绿色荧光表达载体,并使其在A549细胞表达,为后续实验提供了条件。
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