【摘 要】
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通过 PCR方法克隆出大肠杆菌株H-30的胞嘧啶脱氨酶(CD,cytosine deami-nase, EC 3.5.4.1)基因,并将其起始密码子 GTG突变为 ATG,构建了 CD基因的原核重组表达载体pBV220-CD,
【机 构】
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上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室,上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室,上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室 上海 200032,上海 200032,上海 20003
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通过 PCR方法克隆出大肠杆菌株H-30的胞嘧啶脱氨酶(CD,cytosine deami-nase, EC 3.5.4.1)基因,并将其起始密码子 GTG突变为 ATG,构建了 CD基因的原核重组表达载体pBV220-CD,通过测定胞嘧啶脱氨酶活性筛选出CD高表达活性克隆H-30-CD-11,5-氟胞嘧啶(5-FC,5-fluorocytosine)对CD活性克隆有杀灭毒性.DNA序列分析显示 CD高表达活性克隆H-30-CD-11较基因文库中所报道的CD基因存在16个位点碱基改变,引起肽链中氨基酸改变的位点有5个.
The cytosine deaminase (CD) gene of Escherichia coli H-30 was cloned by PCR and the initiation codon GTG was mutated to ATG. The prokaryotic expression of CD gene was constructed The recombinant expression vector pBV220-CD was screened for cytosine deaminase activity, and the CD highly active clones H-30-CD-11, 5-fluorocytosine DNA sequence analysis showed that CD hyper-active clone H-30-CD-11 has 16 base changes in the CD gene reported in the gene library, resulting in five amino acid changes in the peptide chain.
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